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OxiTec™ Glutathione Assay Kit (Colorimetric)

Catalog Number Unit Size
BO-GLU-200 200 assays
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상품 정보

상품 상세설명

제품설명

Glutathione은 체내에 존재하는 Tripeptide로서 Glutathione Peroxidase, Glutathione S-transferase, Thioltransferase 등의 효소 기질로 사용되며 활성산소 종에 의한 손상으로부터 세포를 보호하는 항산화에 관여합니다. Glutathione은 일반적으로 환원된 형태(GSH)로 존재하며 산화 스트레스와 같은 자극에 의해 산화된 형태(GSSG)로 전환됩니다. 따라서 GSH와 GSSG의 비율은 산화 스트레스의 지표로 사용됩니다.


BIOMAX 사의 OxiTec™ Glutathione(GSH/GSSG/Total) Assay Kit는 Sample에 존재하는 Total GSH의 양과 GSSG,GSH의 비율을 측정하기 위한 제품입니다. Total GSH는 산화형인 GSSG가 NADPH, Glutathione Reductase에 의해 2개의 GSH로 환원되고, 환원된 GSH와 기존 Sample 내에 존재하는 GSH가 DTNB와 반응하면서 노란색인 TNB를 형성하여 흡광도 412 nm에서 측정됩니다. 또한, 환원되어 있는 GSH를 Masking Reagent (M2VP)로 먼저 제거하고 산화된 GSSG만을 GSH로 환원시켜 GSSG의 양을 측정할 수 있으며 GSSG/GSH의 비율도 측정 가능합니다.



OxiTec™ Glutathione(GSH/GSSG/Total) Assay Kit
 
 

제품구성

Components

Size

Storage

Assay Buffer

60 ㎖ X 2 Bottles

4 ℃

GSSG Standard (2 mM) 2 ㎖ X 1 vial
Glutathione Reductase(GR) 5 ㎖ X 2 Bottle
NADPH (Lyophilized) 2 vials
Chromogen (DTNB) 5 ㎖ X 2 vials
Masking Reagent (M2VP) 2 ㎖ X 1 vial
* 개봉하지 않은 제품은 빛을 차단한 상태에서 4℃ 보관 시 약 6개월간 안정적입니다.

결과분석

① GSSG STD 와 GSH STD 에서의 각 농도의 시간별 기울기 값을 구합니다.

    - OD412nm 에서 흡광도 측정시 값의 변화는 선형으로 나타나며, 선형 그래프의 함수는 다음의 식에 결정됩니다.


회귀 방정식 : y= ax + b


y = OD412nm
a = 기울기 (slope)
x = x 축 값 (minutes)
b = 절편

- 절편(b) 값은 DTNB Background와 NADPH 첨가 시점 및 측정 시점의 시간적 차이를 의미하는 것으로 제외할 수 있습니다.


OxiTec™ Glutathione(GSH/GSSG/Total) Assay Kit


GSH, GSSG의 0 µM 시간별 그래프이며 이 그래프의 기울기 (Slope)는 0.0117 입니다.



② 각 농도의 기울기 값(①)에서 0 μM에서의 기울기 값을 빼줍니다.

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③ GSH, GSSG STD 에서 구한 Net blank slope 값(②)을 이용하여 선형 그래프를 그립니다. [GSH Calibration curve. GSSG Calibration curve.]

④ ③ 번 선형 그래프의 함수를 그려줍니다.


OxiTec™ Glutathione(GSH/GSSG/Total) Assay Kit

OxiTec™ Glutathione(GSH/GSSG/Total) Assay Kit

Table 1.에서의 Net blank slope 값만 표시한 표이며, Max con.은 5 µM 까지만 표시한 표입니다.



⑤ GSSG sample과 Total GSH sample 의 시간별 기울기 값을 구합니다.

⑥ GSSG sample / GSH sample 기울기를 GSH Calibration curve, GSSG Calibration curve를 이용하여 GSH 농도값(µM),GSSG 농도값(µM)을 구합니다.

⑦ 각각의 농도값에 희석배수를 곱하십시오.

   - Datasheet 앞 Sample preparation 과정에서 희석된 배수입니다.

⑧ GSH/GSSG Ratio는 다음 공식과 같이 계산하여 값을 구합니다.


Ratio = (Total GSH – 2 x GSSG) / GSSG



인용논문

1) Byeon, J.C., Lee, S.E., Kim, T.H., Ahn, J.B., Kim, D.H., Choi, J.S., and Park, J.S. (2019). Design of novel proliposome formulation for antioxidant peptide, glutathione with enhanced oral bioavailability and stability. Drug Deliv 26, 216-225. 10.1080/10717544.2018.1551441.


2) Yoo, D., Jung, W., Son, Y., and Jon, S. (2021). Glutathione-Responsive Gold Nanoparticles as Computed Tomography Contrast Agents for Hepatic Diseases. ACS Applied Bio Materials 4, 4486-4494. 10.1021/acsabm.1c00224.


3) Kim, S., Jeon, H., Bai, S.C., Kim, K.-W., Lee, S., Hur, J.W., and Han, H.-S. (2022). Effects of dietary supplementation with Arthrobacter bussei powder on growth performance, antioxidant capacity, and innate immunity of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei). Aquaculture Reports 25, 101270.


4) Choi, J.H., Go, G.M., and Unno, T. (2022). Diatom frustule silica extracted from Melosira nummuloides ameliorates acetaminophen-induced acute liver injury in mice. Applied Biological Chemistry 65, 73. 10.1186/s13765-022-00741-7.



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